2019年2月12日，浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)系，免疫學(xué)研究所蔡志堅(jiān)教授/王建莉教授課題組在《Immunity》在線發(fā)表了最新研究成果“Specific Decrease in B Cell-Derived Extracellular Vesicles Enhances Post-Chemotherapeutic CD8+ T Cell Responses”。該工作充分揭示了化療后系統(tǒng)性免疫抑制的新機(jī)制，為臨床上提高腫瘤的化療效果提供了新思路。

化療是目前治療癌癥最有效的手段之一，和手術(shù)、放療一起并稱癌癥的三大治療手段。然而，化療長期以來一直與誘導(dǎo)全身性免疫抑制有關(guān)。許多化療藥物是骨髓抑制劑，可以抑制骨髓中血細(xì)胞的產(chǎn)生，減少絕對(duì)白細(xì)胞計(jì)數(shù)，導(dǎo)致淋巴細(xì)胞減少。腫瘤特異的CD8陽性T細(xì)胞是清除化療抵抗或化療后殘余腫瘤細(xì)胞的最主要效應(yīng)細(xì)胞，能有效防止化療后腫瘤的復(fù)發(fā)。但是，化療伴隨的系統(tǒng)性免疫抑制極大程度上限制了腫瘤特異的CD8陽性T細(xì)胞的活化，最終導(dǎo)致化療的失敗，腫瘤復(fù)發(fā)并快速進(jìn)展。因此，充分闡明化療后系統(tǒng)性免疫抑制的機(jī)制，對(duì)提高化療效果，防止腫瘤復(fù)發(fā)具有關(guān)鍵意義。

化療藥物誘導(dǎo)的凋亡腫瘤細(xì)胞可在短時(shí)間內(nèi)向胞外釋放大量的ATP，人體如何處理這樣巨大水平的ATP及其對(duì)機(jī)體抗腫瘤免疫的影響仍不清楚。CD39是外核苷三磷酸二磷酸水解酶1，可將ATP水解為ADP或AMP。 CD73是5-主核苷酸水解酶，可將AMP水解為腺苷。腺苷是一種功能強(qiáng)大的免疫抑制性分子，能夠抑制CD8陽性T細(xì)胞的活化。該研究發(fā)現(xiàn)，B細(xì)胞釋放的CD19陽性胞外囊泡含有高水平的CD39和CD73分子，能將化療藥物誘導(dǎo)的凋亡腫瘤細(xì)胞釋放的ATP水解為腺苷，抑制化療后CD8陽性T細(xì)胞的活化，進(jìn)而削弱化療的抗腫瘤效果。雖然腫瘤小鼠和正常小鼠體內(nèi)CD19陽性胞外囊泡含有相近水平的CD39和CD73分子，并顯示出類似的水解ATP和抑制化療抗腫瘤效果的能力，但與正常小鼠相比，腫瘤小鼠的B細(xì)胞能夠釋放更多水平的胞外囊泡。進(jìn)一步的研究表明，腫瘤微環(huán)境可上調(diào)B細(xì)胞中HIF-1ɑ的蛋白水平，隨后HIF-1ɑ直接結(jié)合到Rab27a基因的啟動(dòng)子，促進(jìn)Rab27a蛋白的表達(dá)，最終促進(jìn)B細(xì)胞分泌更多的胞外囊泡。同樣的，與健康人相比，該研究顯示在不同分期的腫瘤病人血清中檢測(cè)到更高水平的CD19陽性胞外囊泡，而且含有較低水平CD19陽性胞外囊泡病人顯示出更好的化療效果，進(jìn)而提示了血清CD19陽性胞外囊泡在腫瘤診斷及化療效果評(píng)價(jià)中的意義。

除此之外，為了進(jìn)一步揭示CD19陽性胞外囊泡對(duì)化療效果的影響，團(tuán)隊(duì)構(gòu)了建B細(xì)胞特異缺失Rab27a基因的小鼠及腫瘤模型，在化療后該小鼠體內(nèi)CD8陽性T細(xì)胞活化程度明顯增強(qiáng)，甚至有一半小鼠的腫瘤可以完全消失。為了將該發(fā)現(xiàn)與臨床應(yīng)用相聯(lián)系，團(tuán)隊(duì)利用Epstein-Barr病毒（EBVs）特異感染人類B細(xì)胞的特性，將Rab27a小干擾RNA導(dǎo)入滅活的EBVs（Rab27a siRNA/iEBVs），利用Rab27a siRNA/iEBVs特異的抑制人源化NSG小鼠中人B細(xì)胞中Rab27a蛋白的表達(dá)，在人源化小鼠上構(gòu)建腫瘤模型并得出：Rab27a siRNA/iEBVs能明顯提高人源化小鼠化療的效果，并增強(qiáng)人源化NSG小鼠中人CD8陽性T細(xì)胞的數(shù)量。

總的來說，該研究發(fā)現(xiàn)了由CD19陽性胞外囊泡介導(dǎo)的化療后免疫抑制的新機(jī)制，并證實(shí)Rab27a siRNA/iEBVs與化療聯(lián)合的臨床應(yīng)用前景。

該工作主要由浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)系蔡志堅(jiān)教授和王建莉教授課題組完成，基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)系博士生張方慧是論文第一作者，碩士生李榮榮及浙江省腫瘤醫(yī)院楊云山醫(yī)生是論文的共同第一作者，蔡志堅(jiān)教授和王建莉教授是該論文的通訊作者。該課題受到到國家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃“蛋白質(zhì)機(jī)器與生命過程調(diào)控”重點(diǎn)專項(xiàng)；國家“973”計(jì)劃和國家自然科學(xué)基金的支持。

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